L’indexage constitue la méthode de référence pour la détection des maladies virales chez la vigne. Elle fait partie intégrale du Règlement technique d’agrément des clones approuvé par la section vigne du CTPS. Il s’agit d’une méthode biologique et non spécifique qui permet de détecter la présence des virus indépendamment du sérotype présent dans la plante testée. Au Centre de Sélection de la vigne de l’IFV, l’indexage est utilisé comme technique complémentaire aux techniques de laboratoire que sont les analyses ELISA et PCR.

La technique consiste à observer l’apparition de symptômes caractéristiques d’une virose précise après le greffage d’une accession à tester sur une variété indicatrice. Une variété indicatrice (ou indicateur) est une variété choisie pour sa capacité à exprimer les symptômes typiques d’une maladie. Il existe deux types d’indexage :

• Ligneux : greffage en oméga ou greffage en « Chip-Bud » sur des plantes ligneuses
• Herbacé : le greffage est réalisé sur des plantes non lignifiées.

Indexage par greffage ligneux

La collecte des bois aoûtés des souches à tester d’une part, et des variétés indicatrices d’autre part, est réalisée au cours de l’hiver. Environ 10 greffons ou bourgeons de la souche à tester sont ensuite greffés sur l’indicateur approprié.

Figure 1 : greffage ligneux

Après stratification, les plantes greffées (environ 10 par test) sont implantées dans une pépinière spécifique au printemps. Si un virus est présent dans la souche testée, il passera dans l’indicateur après l’établissement des nouvelles jonctions vasculaires. Les rameaux des souches à tester sont retirés environ un mois après l’implantation en pépinière pour faciliter le développement des bourgeons de la variété indicatrice et permettre l’observation des symptômes foliaires.

Figure 2 : transmission du virus dans la variété indicatrice et photo de pépinière d’indexage

Les symptômes sont alors observables en pépinière sur les feuilles des indicateurs pendant 2 à 3 ans

• 3 observations réalisées en automne pour l’Enroulement
• 2 observations réalisées au printemps pour la Marbrure (Fleck) et pour le Court-Noué.
  

Indexage par greffage herbacé

Les bois aoûtés des souches à tester et des variétés indicatrices sont récoltés en hiver. Après bouturage, les plantes sont cultivées dans une serre chauffée. Lorsque les plantes sont bien développées, le greffage herbacé peut être réalisé généralement au printemps et en début d’été.

Figure 3 : variétés indicatrices et boutures des souches à tester

Pour l’indexage herbacé, il est nécessaire d’avoir du matériel de culture au même stade de développement : les rameaux herbacés de la souche à tester et ceux de la variété indicatrice doivent être de même diamètre. Lorsque c’est le cas, 10 rameaux herbacés de l’accession à tester sont greffés sur les tiges herbacées des indicateurs à l’aide d’une machine spécifique qui réalise un greffage en fente. Le greffon est ensuite maintenu en place grâce à une bande adhésive puis les plantes ainsi greffées sont placées en chambre climatique afin de réaliser l’établissement des nouvelles jonctions vasculaires entre la souche à tester et l’indicateur.

Figure 4 : indexage herbacé

Au bout d’un mois environ, les plantes sont placées et maintenues dans une serre en conditions contrôlées (lumière et température). Les rameaux des souches à tester sont souvent éliminés pour favoriser la croissance des rameaux de l’indicateur.
En fonction des virus recherchés, les symptômes sont observés après 4, 8, 12 ou 18 mois. A partir de 4 mois pour certaines viroses, les symptômes peuvent être visualisés en serre sur les jeunes plantes herbacées. Si plus de temps est nécessaire, les plantes sont transplantées dans une autre serre ou sous tunnel pour permettre leur lignification. Les symptômes sont alors observés 8 à 18 mois après le greffage herbacé.

Figure 5 : plants herbacés sur tablard et plants transplantés sous tunnel

Pour valider les résultats des tests, certaines conditions sont nécessaires :

– au moins 3 plants par lot greffé doivent être observables
– les contrôles positifs (présence de symptômes) et négatifs (absence de symptômes) doivent être conforme aux attentes.

Les contrôles positifs sont des souches connues infectées par le virus recherché et greffées sur la variété indicatrice et les contrôles négatifs sont des souches connues saines greffées également sur la variété indicatrice.

Indexage des principaux virus réglementés

Les principaux virus recherchés par indexage sont les virus impliqués dans le Court-Noué et l’Enroulement. La marbrure (Fleck) est également incluse pour la certification des porte-greffes. La période d’observation des symptômes dépend des virus :
– Court-Noué et Marbrure : printemps
– Enroulement : de la fin de l’été jusqu’en milieu d’automne

Figure 6 : principaux virus réglementés et variétés indicatrices utilisées

Indexage spécifique des virus secondaires

Quelques autres virus secondaires peuvent être inclus en fonction de la réglementation du pays concerné. En général, cela inclut les virus impliqués dans le complexe du bois strié (GRSPaV, GVA, GVB) et la détection du « LN33 stem grooving (LNSG) », de la nécrose des nervures «Vein necrosis (GVN)» et de la mosaïque des nervures « Vein Mosaïc (GVM) »

Figure 7 : virus secondaires et variétés indicatrices utilisées

Le délai entre le greffage et l’observation des symptômes est variable et dépend du virus considéré.

Exemple de symptômes sur indicateurs :

Le cas du court-noué

Sur la variété indicatrice Vitis Rupestris, les symptômes se caractérisent par :
– une déformation des feuilles qui deviennent asymétriques,
– limbe incurvé (en forme de cuillère),
– forme buissonnante du feuillage et parfois jaunissement,- développement végétatif réduit des plants.

Figure 8 : symptômes de court-noué sur Rupestris du Lot

Le cas de l’enroulement

Absence de symptômes au printemps, ceux-ci sont observables seulement en fin d’été et automne (les conditions optimales sont 14°C la nuit et 26°C le jour) :
– enroulement des feuilles à partir de la base du rameau vers le haut de la souche,
– coloration du limbe (rougissement sur cépages rouges et jaunissement sur cépages blancs) avec une progression de la périphérie vers le centre des feuilles,
– les nervures principales restent vertes.

 Figure 10 : symptômes d’enroulement sur différents indicateurs      

Des cépages rouges sont utilisés en tant que variétés indicatrices car il est plus facile de visualiser les symptômes sur ceux-ci par rapport aux cépages blancs. A noter que les variétés de porte-greffe n’expriment que rarement les symptômes typiques de l’enroulement.

Symptômes d’enroulement observables au vignoble

Au vignoble, sur les variétés traditionnelles, les principales manifestations de l’enroulement sont identiques à celles observées en indexage. Sur cépages rouges, des taches rouges apparaissent dès les mois d’été, sur les feuilles de la partie inférieure des rameaux. Ce rougissement s’étend progressivement à l’ensemble du limbe. La zone autour des nervures, primaires et secondaires reste épargnée, le limbe s’épaissit et s’enroule vers le bas. A l’automne, les feuilles atteintes peuvent brunir et présenter une nécrose de l’épiderme supérieur. Les cépages blancs sont atteints d’un jaunissement plus difficile à diagnostiquer.
Au niveau de la production, les conséquences peuvent être plus ou moins marquées : taille et nombre de grappes réduits, réduction de la concentration en sucre des baies, baisse du contenu en anthocyanes et polyphénols, augmentation de l’acidité et baisse du pH du moût.
Comme pour beaucoup de viroses, l’intensité des symptômes peut varier en fonction des cépages, du millésime, et de la forme d’enroulement présente.